鑄鐵平板劃線法操作步驟

1.操作前準備：將接種環(huán)2支，酒精燈2個，打火機2個，無菌平板兩包，酒精棉球2瓶，鑷子2個，潔凈燒杯2個置于超凈工作臺，打開紫外燈，滅菌30分鐘。取待純化菌種2支放入超凈工作臺。操作者直立坐于操作臺前，打開操作臺玻璃，高度可供雙手順利出入即可。

2.擦拭：用鑷子取酒精棉球擦拭雙手，在超凈工作臺門口處，并將臺面擦出與肩同寬的正方形區(qū)域，此區(qū)域即為操作區(qū)域。將用畢的棉球放入燒杯中。
3.物品擺放：將酒精燈放于擦拭區(qū)域的中心，將接種環(huán)放于酒精燈的右側，將菌種放于酒精燈的左側，將無菌平板的包裝除去，包裝置于操作區(qū)外，無菌平板置于酒精燈左側。
4.點燃酒精燈：打開酒精燈蓋，將蓋扣于離開操作區(qū)的臺面上，點燃酒精燈，酒精燈周圍3-5cm之內即為無菌區(qū)。
5.灼燒接種環(huán)：右手持接種環(huán)，將接種環(huán)的金屬絲直立于酒精燈外焰處，灼燒至紅透，然后略傾斜接種環(huán)，灼燒金屬桿，注意灼燒時要將金屬絲與金屬桿的連接部分充分灼燒。
6.取菌種：左手持斜面的底部，將管口置于火焰的無菌區(qū)，右手小指打開試管塞，將接種環(huán)的接種絲放于外焰處再次灼燒至紅透，然后將其深入試管內部，稍微涼一下，輕輕取一環(huán)，勿劃破培養(yǎng)基，將接種環(huán)從試管中取出，注意取時勿碰觸試管壁。將試管塞灼燒一圈，塞于試管上。因試管口一直在火焰的外焰處，故其溫度較高，塞試管塞時注意勿燙手。
7.接種：左手取無菌平板一個，用拇指和食指控制皿蓋，其余幾指控制皿底，打開皿蓋，使開口角小于30°，將接種環(huán)上的菌種按圖示進行劃線，一區(qū)法要求連續(xù)劃線，且線的邊緣應劃至培養(yǎng)皿的內緣，線要緊密但不相連。三區(qū)或四區(qū)法要求每劃完一區(qū)，都應灼燒接種環(huán)，后一區(qū)要求與前一區(qū)首尾相連，但不得與其他區(qū)域搭在一起。
8.培養(yǎng)：將接種完畢的平板放于28℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)72小時。
9.整理臺面：操作完畢后，將實驗所需的物品放回原處，并將實驗所產生的垃圾清理干凈，帶出超凈臺，放于垃圾桶中。
10.結果觀察：72小時后，觀察平板，應無雜菌污染，若菌種不在劃線的線上則為雜菌；線應為直的，且每一線都接近平板邊緣，平行的線和線之間要緊密，但不能搭在一起；要有較多的單菌落，至少應有10個以上的單菌落方為合格。